Atividade Antimicrobiana
A incapacidade dos antibióticos existentes em produzir efeitos sobre as bactérias, tem impulsionado muitos estudos em direção aos produtos naturais, especialmente os associados as plantas medicinais. A resistência conferida pelo uso irracional de antibióticos, somado à diminuição de novas substâncias antimicrobianas sintéticas, são situações que vêm despertando na comunidade científica o interesse na busca de novas drogas.
As plantas medicinais sintetizam metabólitos secundários bioativos de diferentes classes (esteroides, triterpenoides, alcaloides, flavonoides, taninos, etc.), que podem apresentar a capacidade de matar ou inibir o crescimento de microrganismos. Com base nisso, o grupo de pesquisa NEPLAME se empenha na investigação de extratos vegetais, óleos essenciais e substâncias isoladas de espécies vegetais nativas da Caatinga, como potenciais agentes antimicrobianos.
Determinação da Concentração Inibitória mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM)
Os métodos de diluição são os mais consistentes para a determinação da atividade antimicrobiana, pois permitem estimar quantitativamente a concentração do agente ativo. Sendo assim, a atividade antimicrobiana é avaliada através do método da microdiluição, que consiste na determinação da menor quantidade da amostra necessária para inibir o crescimento microbiano visível; esse valor é conhecido como Concentração Inibitória Mínima (CIM). Após a determinação da CIM, também é possível estimar a Concentração Bactericida Mínima (CBM), que equivale a menor concentração da amostra capaz de matar o microrganismo teste.
O procedimento consiste na preparação de uma solução estoque de 25 mg.mL-1 de cada amostra a ser testada, utilizando uma solução aquosa de DMSO a 10% (v/v). Em seguida, em microplacas de 96 poços contendo caldo Muller-Hinton são realizadas diluições seriadas com as soluções, obtendo-se concentrações que variam de 12,5 - 0,0975 mg.mL-1. Posteriormente,10 μL do inóculo preparado com uma suspensão padronizada (escala de 0,5 McFarland) de cada microrganismo é adicionado aos poços, e as placas são incubadas a 37 ° C durante 18-24 horas. Após esse período, o cloreto de 2,3,5-trifenil-tetrazólio (CTT) a 1% é adicionado a cada poço para a constatação da mudança de cor do CTT (incolor) para o vermelho, representando o metabolismo bacteriano ativo. São reservados poços nas microplacas para controle de esterilidade do caldo, de crescimento bacteriano e da ação do antimicrobiano de referência
Para determinar a CBM, alíquotas são retiradas de cada um dos poços do ensaio anterior e transferidas para placas de Petri contendo ágar Mueller-Hinton. As placas são incubadas durante 24 h a 37 °C. A ausência de colônia bacteriana para uma dada concentração indica que essa foi capaz de matar 99,9% ou mais do inóculo bacteriano utilizado.
Referências
ALIGIANIS, N. et al. Composition and antimicrobial activity of the essential oil of two Origanum species. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 49, n. 9, p. 4168-4170, 2001.
BALOUIRI, Mounyr; SADIKI, Moulay; IBNSOUDA, Saad Koraichi. Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review. Journal of pharmaceutical analysis, v. 6, n. 2, p. 71-79, 2016.
CHEW, Yik Ling et al. Anti-methicillin-resistance Staphylococcus aureus (MRSA) compounds from Bauhinia kockiana Korth. And their mechanism of antibacterial activity. BMC complementary and alternative medicine, v. 18, n. 1, p. 70, 2018.
ROEMER, T. Confronting the Challenges of Natural Product-Based Antifungal Discovery. Chemistry & Biology Perspective, v. 18, p 148-164, 2011.
VAN BOECKEL, T. P. et al. Global antibiotic consumption 2000 to 2010: an analysis of national pharmaceutical sales data. The Lancet Infectious Diseases, v. 14, p. 742-750, 2014.
As plantas medicinais sintetizam metabólitos secundários bioativos de diferentes classes (esteroides, triterpenoides, alcaloides, flavonoides, taninos, etc.), que podem apresentar a capacidade de matar ou inibir o crescimento de microrganismos. Com base nisso, o grupo de pesquisa NEPLAME se empenha na investigação de extratos vegetais, óleos essenciais e substâncias isoladas de espécies vegetais nativas da Caatinga, como potenciais agentes antimicrobianos.
Determinação da Concentração Inibitória mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM)
Os métodos de diluição são os mais consistentes para a determinação da atividade antimicrobiana, pois permitem estimar quantitativamente a concentração do agente ativo. Sendo assim, a atividade antimicrobiana é avaliada através do método da microdiluição, que consiste na determinação da menor quantidade da amostra necessária para inibir o crescimento microbiano visível; esse valor é conhecido como Concentração Inibitória Mínima (CIM). Após a determinação da CIM, também é possível estimar a Concentração Bactericida Mínima (CBM), que equivale a menor concentração da amostra capaz de matar o microrganismo teste.
O procedimento consiste na preparação de uma solução estoque de 25 mg.mL-1 de cada amostra a ser testada, utilizando uma solução aquosa de DMSO a 10% (v/v). Em seguida, em microplacas de 96 poços contendo caldo Muller-Hinton são realizadas diluições seriadas com as soluções, obtendo-se concentrações que variam de 12,5 - 0,0975 mg.mL-1. Posteriormente,10 μL do inóculo preparado com uma suspensão padronizada (escala de 0,5 McFarland) de cada microrganismo é adicionado aos poços, e as placas são incubadas a 37 ° C durante 18-24 horas. Após esse período, o cloreto de 2,3,5-trifenil-tetrazólio (CTT) a 1% é adicionado a cada poço para a constatação da mudança de cor do CTT (incolor) para o vermelho, representando o metabolismo bacteriano ativo. São reservados poços nas microplacas para controle de esterilidade do caldo, de crescimento bacteriano e da ação do antimicrobiano de referência
Para determinar a CBM, alíquotas são retiradas de cada um dos poços do ensaio anterior e transferidas para placas de Petri contendo ágar Mueller-Hinton. As placas são incubadas durante 24 h a 37 °C. A ausência de colônia bacteriana para uma dada concentração indica que essa foi capaz de matar 99,9% ou mais do inóculo bacteriano utilizado.
Referências
ALIGIANIS, N. et al. Composition and antimicrobial activity of the essential oil of two Origanum species. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 49, n. 9, p. 4168-4170, 2001.
BALOUIRI, Mounyr; SADIKI, Moulay; IBNSOUDA, Saad Koraichi. Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review. Journal of pharmaceutical analysis, v. 6, n. 2, p. 71-79, 2016.
CHEW, Yik Ling et al. Anti-methicillin-resistance Staphylococcus aureus (MRSA) compounds from Bauhinia kockiana Korth. And their mechanism of antibacterial activity. BMC complementary and alternative medicine, v. 18, n. 1, p. 70, 2018.
ROEMER, T. Confronting the Challenges of Natural Product-Based Antifungal Discovery. Chemistry & Biology Perspective, v. 18, p 148-164, 2011.
VAN BOECKEL, T. P. et al. Global antibiotic consumption 2000 to 2010: an analysis of national pharmaceutical sales data. The Lancet Infectious Diseases, v. 14, p. 742-750, 2014.